時(shí)間分辨熒光免疫分析法（Time resolved fluoroisnmunoassay,TRFIA）是上世紀70年代由芬蘭的Soini和Hemmia提出的一種新型的檢測手段，TRFIA 用稀土離子作為示蹤物標記蛋白質(zhì)、多肽、激素、抗體、核酸探針或生物活性細胞,與其螯合劑、增強液(有一部分不需要) 在待反應體系(如:抗原抗體免疫反應、生物素親和素反應、核酸探針雜交反應、靶細胞與效應細胞的殺傷反應等) 發(fā)生特異性親和反應后,用時(shí)間分辨熒光分析儀測定最后產(chǎn)物中的熒光強度,根據熒光強度和相對熒光強度比值,推測反應體系中分析物的濃度,達到定量分析的目的。TRFIA與化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)并稱(chēng)為三大超靈敏檢測技術(shù)，在食品檢測、醫學(xué)臨床檢測、環(huán)境檢測以及生物學(xué)科研檢測等方面廣泛應用。

目前，根據熒光增強技術(shù)的不同，TRFIA可分為三種類(lèi)型：(1)DELFIA (Dissociation enhanced lanthanide fluoroimmunoassay)系統，為芬蘭wallac公司（2000年并入美國PerkinElmer公司）于上世紀80年代推出，因其具有非常高靈敏度，目前在國內臨床疾病檢測領(lǐng)域已有廣泛應用；(2)DSLFIA（Direct solid Pahse lanthanide fluoroimmunoassay）系統，為加拿大Cyber Fluor公司推出，但因靈敏度不夠理想，目前在國內沒(méi)有推廣；(3)基于熒光微球的TRFIA (Micro-TRFIA)，Micro-TRFIA是一種全新的時(shí)間分辨熒光檢測手段，它結合了鑭族元素熒光的長(cháng)壽命和納米微球的信號放大效應，將鑭族元素Eu3+及其配合物包裹于納米微球中，經(jīng)過(guò)表面活化后，將抗體標記于標記物表面，形成復合物，將該復合物用于免疫檢測，可極大地提高靈敏度，并獲得較為寬闊的線(xiàn)性范圍，其實(shí)際性能不低于甚至高于DELIFA技術(shù)。

    TRFIA的三種類(lèi)型中前兩者因其需要解離后再增強或者需要導入生物素-親和素信號放大系統，無(wú)法與免疫層析技術(shù)相結合，僅能與酶標板配合使用，需要多次洗板操作，過(guò)程繁復，檢測時(shí)間長(cháng)，且需要較為昂貴的熒光讀數儀讀數，因此目前一般僅限于實(shí)驗室的檢測，無(wú)法實(shí)現POCT（Point-Of-Care Testing）應用，而Micro-TRFIA技術(shù)采用高分子聚合物將幾千乃至上萬(wàn)個(gè)熒光分子包裹或連接在聚合物納米粒子中，不但能將熒光信號成千上萬(wàn)倍的放大，滿(mǎn)足超低含量生物組分的測定，而且高分子納米粒子形成的網(wǎng)狀外殼對有機染料能起到很好保護作用，可有效減弱測定環(huán)境中的活性氧、自由基或其他試劑的光漂白作用，顯著(zhù)提高熒光分子的光穩定性。更為重要的是，Micro-TRFIA技術(shù)可以與免疫層析技術(shù)（Lateral Flow Immunochromatography Assay）完美結合，開(kāi)發(fā)出熒光定量免疫層析技術(shù)平臺，實(shí)現現場(chǎng)快速定量檢測，檢測靈敏度比膠體金免疫層析技術(shù)高2-3個(gè)數量級，因此成為目前國內外研究的新熱點(diǎn)。

      微測生物一直致力于基于Micro-TRFIA技術(shù)的時(shí)間分辨熒光方法學(xué)的研發(fā)，開(kāi)發(fā)出的Microdetection ^TM系列 時(shí)間分辨熒光微球(Time Resolved Fluorescent Microsphere)，每個(gè)微球中最多可包裹約18萬(wàn)個(gè)熒光分子，大大提高了熒光微球的熒光強度，有效提高了分析靈敏度；同時(shí)熒光微球表面修飾有合適密度的羧基或其它功能基團，用于與蛋白或抗體的共價(jià)偶聯(lián)，提高了標記物的穩定性。更為重要的是由于微球包埋的稀土離子已經(jīng)過(guò)了螯合，無(wú)需解離增強步驟，因此從根本上解決了傳統的DELFIA法只能在液相中而不能在固相界面反應的問(wèn)題，從而解決了將時(shí)間分辨熒光應用于免疫層析平臺的技術(shù)瓶頸（詳情請見(jiàn)微測生物時(shí)間分辨熒光免疫層析定量檢測平臺），在此基礎上可開(kāi)發(fā)出靈敏度高于普通膠體金或有色乳膠免疫層析方法1-3個(gè)數量級的定量檢測技術(shù)。同樣時(shí)間分辨熒光微球也可以用于微孔板超敏定量檢測技術(shù)平臺（詳情請見(jiàn)微測生物時(shí)間分辨熒光微孔板超敏定量檢測技術(shù)平臺），只需洗滌幾次后即可進(jìn)行熒光測定，操作步驟比DELFIA簡(jiǎn)單很多，更容易實(shí)現自動(dòng)化操作。